COMPARACION ENTRE PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS
COMPARACION DE LAS PRINCIPALES MOLECULAS BIOLOGICAS
organelas Celulares
Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.
Biopsia:(del
griego bios
= vida y oasis = visión) Examen u obtención de
tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional, excisional, por sacabocado,
por punción y absorción, por raspado, por trepanación
En qué consiste el proceso
de fijación?
2.
Aumentar la dureza del tejido
para facilitar la preparación de finas películas de éste.
Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la Autolisis
y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM.
La fijación mantiene las estructuras al estimular
la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.
Que funciones tiene el formaldehido al 10% y el glutaraldheido al
3%?
Se utiliza para la
conservación de animales y cadáveres; es un fijador regular,
práctico y fácil de manejar, tiene el inconveniente de polimerizar los fenoles
libres, que son muy frecuentes en los vegetales y que una fijación prolongada
los endurece excesivamente. No debe ser usado o se debe usar con ciertas precauciones
en tejidos muy lignificados. Reacciona con los grupos aminos de las proteínas, formando enlaces transversales
y conservando las estructuras de la célula. Es el más usado.
Glutaraldehído al 2.5%
El
glutaraldehido es un excelente fijador para preservar estructuras delicadas de
la célula cuando se usan resinas plásticas, pero también es un buen fijador
estructural para la infiltración en parafina. Presenta dos grupos aldehido
reactivos y por tante es un agente entrelazante muy fuerte. La tendencia a
formar uniones cruzadas hace del glutaraldehido un fijador útil además para
mantener la integridad estructural de los tejidos cuando se use un programa de
fijación débil para inmunolocalización o para el tratamiento con proteasas para
hibriación in situ. La penetración en tejidos es menor que la del
formaldehido; por tanto hay que permitirle más tiempo ara la fijación. Si es
posible, fijar los tejidos a temperaturas bajas (4ºC). formando
enlaces transversales en las proteínas y manteniendo las estructuras de la
célula. Es el primer fijador de elección para microscopía electrónica
porque tienen una excepcional capacidad para preservar la morfología celular. Inconvenientes:
Tiene velocidad de penetración muy baja por lo que los fragmentos de tejido no
pueden tener volumen superior a unos pocos milímetros cúbicos
diferencia entre el procesamiento manual y automatizado
procesamiento manual:
procesamiento manual:
-No suele hacerse
habitualmente.
- Muestras que no
pueden meterse en un proceso automático.
-Posibilidad de emplear
agente <<hidratantes.
-Utilizar color para
acelerar el proceso en paso como fijación.
Automatizado
-Permite procesar gran
cantidad de muestras diferentes.
- Economizan en gran
cantidad de líquidos para el proceso.
-requiere de limpieza y
cuidado para evitar que el aparato se descomponga.
manual se realiza en una hora, mientras que
una VHS automatizada se realiza en general en 20 minutos.
Procesamiento de la
muestra:
Deshidratación:
Emulsificacion - inclusión o
impregnación
Embebido en parafina:
Ø Los pasos en
el proceso de muestra son: deshidratación, clarificación, emulsificacion,
embebido de parafina, explique
brevemente en qué consiste?
Procesamiento de la
muestra:
Con el propósito de obtener cortes
delgados, los tejidos deben ser impregnados posteriores a la fijación, con
sustancias que les permitan adquirir una consistencia rígida.
Deshidratación:
Después que la muestra ha sido fijada
se elimina el fijador y se deshidrata.
Los tejidos contienen
grandes cantidades de agua, tanto intra como extracelular, que debe ser
eliminada y reemplazada por parafina. Este proceso se denomina deshidratación.
Debe ser realizado mediante el uso de alguna sustancia que tenga la capacidad
de mezclarse con el agua y que tenga cierta afinidad por ella, de manera que
pueda penetrar fácilmente entre las células de los tejidos. La deshidratación
se logra mejor utilizando distintas concentraciones del agente deshidratador.
Por ejemplo, Alcohol Etílico o Acetona. Iniciando con alcohol al 50 %, luego con
una solución de 60%, 70%, 80%, 90%, 96% y alcanzando de manera paulatina el
alcohol al 100 % para eliminar el
agua. Esto se hace porque si se colocara el tejido en una
solución al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría muy rápido del
tejido y se deformaría.
Luego de deshidratar
el tejido, se pasa a una solución de una sustancia que es miscible tanto con el
alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la mayoría de los casos
se utiliza como medio de inclusión Parafina líquida). La sustancia comúnmente utilizada es el Xileno o
Xilol. De la misma manera se coloca la muestra de tejido en un
recipiente de Xilol, el Xilol solo es soluble en alcohol al 100%. Se llama
aclaramiento ya que el tejido se torna transparente o claro en el xileno, esto
se debe a que cambia su índice de refracción. También se pueden utilizar
Tolueno, Benzol o Cloroformo como medios de aclaramiento.
El alcohol y el xileno disuelven
los lípidos de la célula y por lo cual al
extraerse también se extraen las grasas y los lípidos de la célula.
Emulsificacion - inclusión o
impregnación
A fin de que se
puedan obtener cortes suficientemente finos para ser observados al microscopio, los tejidos tienen
que ser incluidos y envueltos por una sustancia de consistencia firme. Las
sustancias usadas para este fin es: parafina.
El objeto de la
inclusión es:
·
Tener un objeto lo suficientemente duro
para su manejo y corte.
La inclusión se logra
al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado
líquido al tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el
tejido. Por lo general se coloca la muestra de tejido en un recipiente y se le
agrega la parafina fundida a 60º C, colocando la muestra en una estufa de 30
minutos a 6 horas manteniendo la temperatura a 60º C.
Debido al calor, el xilol o el
benzol se evaporan y los espacios anteriormente ocupados por ellos son ahora
ocupados por la parafina. Después se coloca la pieza y un poco de parafina
fundida en un molde de papel o metal de forma rectangular y se deja solidificar
a temperatura ambiente, formándose un
bloque sólido de parafina con el trozo de tejido incluido, a este bloque se le
denomina Taco
Embebido en parafina:
Este proceso comprende la impregnación
de todos los tejidos con un medio que ocupe todas las cavidades naturales,
espacios e intersticio tisular, lo cual proporciona la consistencia firme
necesaria para hacer cortes lo suficientemente delgados sin provocar
distorsión morfológica y sin alterar las relaciones espaciales del tejido
y los elementos celulares, mediante la utilización de un micrótomo.
Ø Como se realiza la inclusión
de parafina o resina?
Por lo general se coloca la muestra de
tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a 60º C, colocando
la muestra en una estufa de 30 minutos a 6 horas manteniendo la temperatura a
60º C. Debido al calor, el xilol o el benzol se evaporan y los espacios
anteriormente ocupados por ellos son ahora ocupados por la parafina. Después se
coloca la pieza y un poco de parafina fundida en un molde de papel o metal de
forma rectangular y se deja solidificar a temperatura ambiente, formándose un
bloque sólido de parafina con el trozo de tejido incluido, a este bloque se le
denomina Taco.
Ø Que significa tinción de
rutina?
La tinción de rutina se
utiliza para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras o sustancias. La tinción mas utilizada también llamada de rutina es la de hematoxilina y
eosina (H&E).Se usa un colorante llamado hematoxilina que tiene las
sustancias acidas o que las contengan, como el núcleo que contiene acido
desoxirribonucleico (ADN) La eosina amarillenta tiñe las estructuras básicas
como el citoplasma y demás orgánulos eosinofilicos de la célula.
Otra tinción muy usada es la de Papanicolaou, usa colorantes como: OG6 EA50
Hematoxilina de Harris o Básica según el caso.
Otra tinción muy usada es la de Papanicolaou, usa colorantes como: OG6 EA50
Hematoxilina de Harris o Básica según el caso.
Cuál es la función del
montaje en una muestra histológica?
Si queremos fijar las
muestras una vez cortadas a un portaobjetos para observar a microscopio óptico,
utilizamos 2 métodos de montaje:
Baño termos atizado: Consiste en una cubeta dentro de la cual nos encontramos
con la solución de montaje, que en nuestro caso está formada por gelatina 1% a
38ºC que hace la función de adhesivo de la muestra en el portaobjeto. Cuando
cortamos al micrótomo, obtenemos una tirita con los cortes, pegados por los
extremos. Esta tirita se pone flotando sobre la solución de montaje. El corte
se irá extendiendo ligeramente, eliminándose las arrugas y pliegues debidos al
corte, pero no se llegará a derretir, porque la temperatura de la gelatina no
alcanza el punto de fusión de la parafina. Luego, con un portaobjetos
“pescamos” las muestras. De esta manera obtenemos en una misma porta varios
cortes del mismo bloque o taco de inclusión. Los portaobjetos llevan un
tratamiento de limpieza antes de utilizar para permitir mejor la adherencia de
los cortes. Por tanto, se lavan antes con agua y jabón y finalmente con agua
destilada. Y se guardan con éter y alcohol al 50% en un frasco.
Plancha caliente: Primero hay que preparar una solución de montaje (albúmina, glicerina.) que funcionan como adhesivos. Esta solución la prepararemos a partir de una solución madre que hay que diluir. El portaobjetos lo ponemos sobre la plancha y añadimos la solución de montaje, unas gotas. Sobre la solución de montaje ponemos las muestras a estudiar. Escurrimos el exceso y dejamos secar sobre la plancha. En cualquiera de los dos métodos de montaje, los cortes se guardan al final en una estufa a 38ºC para dejar evaporar la solución de montaje y terminar de adherir, como mínimo 48 horas. Lo podemos dejar cuanto tiempo queramos antes de teñir
Plancha caliente: Primero hay que preparar una solución de montaje (albúmina, glicerina.) que funcionan como adhesivos. Esta solución la prepararemos a partir de una solución madre que hay que diluir. El portaobjetos lo ponemos sobre la plancha y añadimos la solución de montaje, unas gotas. Sobre la solución de montaje ponemos las muestras a estudiar. Escurrimos el exceso y dejamos secar sobre la plancha. En cualquiera de los dos métodos de montaje, los cortes se guardan al final en una estufa a 38ºC para dejar evaporar la solución de montaje y terminar de adherir, como mínimo 48 horas. Lo podemos dejar cuanto tiempo queramos antes de teñir
UNIDADES DE MEDICION EN MICROSCOPIA
El nanómetro es la unidad de longitud que equivale a
una mil millonésima parte de un metro. ‘Nano’ significa una mil millonésima
parte
El picómetro es una unidad de longitud
del SI que equivale a una billonésima (0,000 000 000 001 o 1•10-12) parte de un
metro. Se abrevia pm.
1 pm = 1x10−12 m.
El micrómetro, En un rango del orden de centésimas o de milésimas de milímetro, 0,01 mm ó 0,001 mm (micra) respectivamente.
TEJIDOS ANIMALES
Los tejidos de los animales se dividen en cuatro tipos: epitelial, conectivo, muscular y nervioso. Los dos primeros son poco especializados, a diferencia de los segundos que se caracterizan por su gran especialización. Cabe señalar que estos cuatro tipos de tejidos están interrelacionados entre sí, formando los diversos órganos y sistemas de los individuos.
TEJIDO EPITELIAL
Las células de este tejido forman capas continuas, casi sin sustancias intercelulares. Se encuentra formando la epidermis, las vías que conectan con el exterior (tractos digestivo, respiratorio y urogenital), la capa interna de los vasos linfáticos y sanguíneos (arterias, venas y capilares) y las cavidades internas del organismo. Las células del tejido epitelial tienen formas plana, prismáticas y poliédricas, de dimensiones variables. Casi todos los epitelios contactan con el tejido conjuntivo. Las funciones del tejido epitelial son:
-Revestimiento externo (piel)
-Revestimiento interno (epitelio respiratorio, del intestino, etc.)
-Protección (barrera mecánica contra gérmenes y traumas)
-Absorción (epitelio intestinal)
-Secreción (epitelio de las diversas glándulas)
TEJIDO CONJUNTIVO
Es un tejido que se caracteriza por presentar células de formas variadas, que sintetizan un material que las separa entre sí. Este material extracelular está formado por fibras conjuntivas (colágenas, elásticas y reticulares) y por una matriz traslúcida de diferente viscosidad llamada sustancia fundamental. Las diferentes características de esta sustancia fundamental del tejido conjuntivo dan lugar a otros tejidos: tejido conectivo (o conjuntivo propiamente dicho), tejido adiposo, tejido cartilaginoso, tejido óseo y tejido sanguíneo.
-TEJIDO CONECTIVO: Se distribuye ampliamente por todo el organismo, ubicándose debajo de la epidermis (dermis), en las submucosas y rellenando los espacios vacíos que hay entre los órganos. Cumple funciones de protección, de sostén, de defensa, de nutrición y reparación.
-TEJIDO ADIPOSO: sus células se denominan adipocitos y están especializadas para acumular grasa como triglicéridos. Carecen de sustancia fundamental. Los adipocitos se acumulan en la capa subcutánea de la piel y actúan como aislantes del frío y del calor. Cumplen funciones estructurales, de reserva y de protección contra traumas.
-TEJIDO CARTILAGINOSO: formado por células (condrocitos) que se distribuyen en las superficies de las articulaciones, en las vías respiratorias (cartílagos nasales, laringe) y en los cartílagos de las costillas. Los condrocitos tienen forma variable y están separados por abundante sustancia fundamental muy viscosa, flexible y resistente. La función del tejido cartilaginoso es de soporte y sostén.
-TEJIDO ÓSEO: formado por osteocitos de forma aplanada, rodeados de una sustancia fundamental calcificada, constituida por sales de calcio y de fósforo que imposibilitan la difusión de nutrientes hacia las células óseas. Por lo tanto, los osteocitos se nutren a través de canalículos rodeados por la sustancia fundamental, que adopta forma de laminillas de fibras colágenas. El tejido óseo es muy rígido y resistente, siendo su principal función la protección de órganos vitales (cráneo y tórax). También brinda apoyo a la musculatura y aloja y protege a la médula ósea, presente en los huesos largos del esqueleto (fémur, tibia, radio, etc.).
-TEJIDO SANGUÍNEO: formado por los glóbulos rojos (eritrocitos), los glóbulos blancos (leucocitos), las plaquetas y por una sustancia líquida llamada plasma. La sangre permite que el organismo animal mantenga el equilibrio fisiológico (homeostasis), fundamental para los procesos vitales. Sus funciones son proteger al organismo y el transporte hacia todas las células de nutrientes, oxígeno, dióxido de carbono, hormonas, enzimas, vitaminas y productos de desecho.
Los eritrocitos contienen hemoglobina en su interior, lo que le da su coloración rojiza. Transportan oxígeno hacia las células y eliminan dióxido de carbono al exterior. Los glóbulos rojos de mamíferos tienen forma de disco bicóncavo y carecen de núcleo. Otros animales, como algunas aves, tienen eritrocitos nucleados y de forma ovalada.
Los leucocitos tienen por función proteger al organismo de gérmenes patógenos y cuerpos extraños. Hay glóbulos blancos denominados polimorfonucleares, ya que poseen núcleos de distintas formas. Actúan en reacciones inflamatorias y son los neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Aquellos leucocitos con núcleos redondeados y funciones específicas son los linfocitos y monocitos.
Las plaquetas son restos de fragmentos celulares provenientes de la médula ósea. Intervienen en la coagulación de la sangre.
El plasma es la parte líquida del tejido sanguíneo por donde se vehiculizan los glóbulos rojos, los blancos y las plaquetas. Está formado por agua, albúminas y globulinas (proteínas), hormonas, enzimas, vitaminas, glucosa, lípidos, aminoácidos y electrolitos (sodio, potasio, cloruros, fosfatos, calcio, bicarbonatos, etc.)
TEJIDO MUSCULAR
Está formado por células muy largas, compuestas por estructuras contráctiles llamadas miofibrillas. Las células del tejido muscular se denominan fibras musculares, y las miofibrillas que contienen aseguran los movimientos del cuerpo. Las miofibrillas están compuestas por miofilamentos proteicos de actina y miosina. Los miofilamentos son responsables de la contracción muscular cuando existen estímulos eléctricos o químicos. En cada miofibrilla hay miles de miofilamentos, cuya disposición da lugar a estructuras denominadas sarcómeros que permiten la contracción del músculo.
De acuerdo a la forma y al tipo de contracción, los músculos pueden ser esqueléticos, cardíacos y lisos.
-Músculo esquelético: Las fibras musculares son alargadas, poseen numerosos núcleos y bandas transversales que le dan un aspecto estriado. Tienen la facultad de contraerse de manera rápida y precisa en forma voluntaria.
-Músculo cardíaco: es similar a la fibra muscular esquelética, con aspecto alargado y estriaciones transversales, pero contiene un o dos núcleos centrales. El músculo cardíaco tiene una contracción involuntaria y se halla en las paredes del corazón.
-Músculo liso:
El tejido muscular tiene por función mantener la actitud postural y la estabilidad del cuerpo. Junto con los huesos controla el equilibrio del cuerpo. Los músculos también intervienen en las manifestaciones faciales (mímica) que permiten expresar los diferentes estímulos que provienen del medio ambiente. Además, protegen a los órganos internos (vísceras), producen calor debido a la importante irrigación sanguínea que tienen y le dan forma al cuerpo.
-TEJIDO CARTILAGINOSO: formado por células (condrocitos) que se distribuyen en las superficies de las articulaciones, en las vías respiratorias (cartílagos nasales, laringe) y en los cartílagos de las costillas. Los condrocitos tienen forma variable y están separados por abundante sustancia fundamental muy viscosa, flexible y resistente. La función del tejido cartilaginoso es de soporte y sostén.
-TEJIDO ÓSEO: formado por osteocitos de forma aplanada, rodeados de una sustancia fundamental calcificada, constituida por sales de calcio y de fósforo que imposibilitan la difusión de nutrientes hacia las células óseas. Por lo tanto, los osteocitos se nutren a través de canalículos rodeados por la sustancia fundamental, que adopta forma de laminillas de fibras colágenas. El tejido óseo es muy rígido y resistente, siendo su principal función la protección de órganos vitales (cráneo y tórax). También brinda apoyo a la musculatura y aloja y protege a la médula ósea, presente en los huesos largos del esqueleto (fémur, tibia, radio, etc.).
-TEJIDO SANGUÍNEO: formado por los glóbulos rojos (eritrocitos), los glóbulos blancos (leucocitos), las plaquetas y por una sustancia líquida llamada plasma. La sangre permite que el organismo animal mantenga el equilibrio fisiológico (homeostasis), fundamental para los procesos vitales. Sus funciones son proteger al organismo y el transporte hacia todas las células de nutrientes, oxígeno, dióxido de carbono, hormonas, enzimas, vitaminas y productos de desecho.
Los eritrocitos contienen hemoglobina en su interior, lo que le da su coloración rojiza. Transportan oxígeno hacia las células y eliminan dióxido de carbono al exterior. Los glóbulos rojos de mamíferos tienen forma de disco bicóncavo y carecen de núcleo. Otros animales, como algunas aves, tienen eritrocitos nucleados y de forma ovalada.
Los leucocitos tienen por función proteger al organismo de gérmenes patógenos y cuerpos extraños. Hay glóbulos blancos denominados polimorfonucleares, ya que poseen núcleos de distintas formas. Actúan en reacciones inflamatorias y son los neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Aquellos leucocitos con núcleos redondeados y funciones específicas son los linfocitos y monocitos.
Las plaquetas son restos de fragmentos celulares provenientes de la médula ósea. Intervienen en la coagulación de la sangre.
El plasma es la parte líquida del tejido sanguíneo por donde se vehiculizan los glóbulos rojos, los blancos y las plaquetas. Está formado por agua, albúminas y globulinas (proteínas), hormonas, enzimas, vitaminas, glucosa, lípidos, aminoácidos y electrolitos (sodio, potasio, cloruros, fosfatos, calcio, bicarbonatos, etc.)
TEJIDO MUSCULAR
Está formado por células muy largas, compuestas por estructuras contráctiles llamadas miofibrillas. Las células del tejido muscular se denominan fibras musculares, y las miofibrillas que contienen aseguran los movimientos del cuerpo. Las miofibrillas están compuestas por miofilamentos proteicos de actina y miosina. Los miofilamentos son responsables de la contracción muscular cuando existen estímulos eléctricos o químicos. En cada miofibrilla hay miles de miofilamentos, cuya disposición da lugar a estructuras denominadas sarcómeros que permiten la contracción del músculo.
De acuerdo a la forma y al tipo de contracción, los músculos pueden ser esqueléticos, cardíacos y lisos.
-Músculo esquelético: Las fibras musculares son alargadas, poseen numerosos núcleos y bandas transversales que le dan un aspecto estriado. Tienen la facultad de contraerse de manera rápida y precisa en forma voluntaria.
-Músculo cardíaco: es similar a la fibra muscular esquelética, con aspecto alargado y estriaciones transversales, pero contiene un o dos núcleos centrales. El músculo cardíaco tiene una contracción involuntaria y se halla en las paredes del corazón.
-Músculo liso:
El tejido muscular tiene por función mantener la actitud postural y la estabilidad del cuerpo. Junto con los huesos controla el equilibrio del cuerpo. Los músculos también intervienen en las manifestaciones faciales (mímica) que permiten expresar los diferentes estímulos que provienen del medio ambiente. Además, protegen a los órganos internos (vísceras), producen calor debido a la importante irrigación sanguínea que tienen y le dan forma al cuerpo.
TEJIDO NERVIOSO
Está formado por células nerviosas lamadas neuronas y por células de la glia denominadas neuroglia.
-Neuronas: de formas diversa aunque por lo general estrelladas, tienen propiedades de excitabilidad, ya que recibe estímulos internos y externos, de conductividad, por transmitir impulsos y de integración, ya que controla y coordina las diversas funciones del organismo. Las neuronas poseen prolongaciones citoplasmáticas cortas llamadas dendritas, y una más larga denominada axón, cubierta por células especiales llamadas de Schwann. La principal función de las neuronas es comunicarse en forma precisa, rápida y a una larga distancia con otras células nerviosas, glandulares o musculares mediante señales eléctricas llamadas impulsos nerviosos.
.
-Células de la glia: su función es proteger y brindar nutrientes a las neuronas. Forma la sustancia de sostén de los centros nerviosos y está compuesta por una fina red que contiene células ramificadas.
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